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甲基绿-派络宁染色液
简介:
甲基绿-派洛宁(methyl green-pyronin)为碱性染料,它分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。当甲基绿与派洛宁作为混合染料时,甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色;派洛宁与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用,同时两种核酸分子都是多聚体,而其聚合程度有所不同。甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。而派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色(但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色)。即RNA对派洛宁亲和力大,被染成红色,而DNA对甲基绿亲和力大,被染成绿色。
伊势久甲基绿-派洛宁染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。一方面可以在本甲基绿-派洛宁染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色,另一方面也可以在免疫组化染色后再进行甲基绿-派洛宁复染。该产品仅适用于科研实验,不可做他用。
操作步骤(仅供参考):
(一)石蜡切片染色
1、 组织放入Carnoy固定液或10%中性福尔马林固定。
2、 切片5 um,常规脱蜡至水,蒸馏水稍洗。
3、 入甲基绿-派洛宁染色液室温浸染。
4、 取出切片,用滤纸稍微吸干切片周围染色液。
5、 用丁三醇(也可用丙酮或正戊醇)冲洗3次。
6、 二甲苯透明,中性树胶封固。
(二)冰冻切片染色
1、 蒸馏水冲洗2 min。
2、 切片入甲基绿-派洛宁染色液室温浸染。
3、 用蒸馏水冲洗2次,此时样本呈蓝色。
4、 余下步骤同石蜡切片染色。
(三)细胞染色
1、 用4%多聚甲醛固定10 min以上。
2、 蒸馏水洗涤。
3、 换用新鲜的蒸馏水,再洗涤。
4、 用甲基绿-派洛宁染色液染色。
5、 显微镜下观察。
(四) 荧光染色
1、 如果进行免疫荧光染色,在染色后应70%乙醇洗涤2次。
2、 95%乙醇脱水2 min。
3、 PBS或生理盐水或TBS等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡。
4、 进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色。
注意事项:
首次使用染色液时建议先取1~2个样品做预实验。
甲基绿-派洛宁染色液染色可以根据染色结果和要求调整时间。
有些粘液细胞有可能被派洛宁染成红色,应注意区分。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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