产品简介:
病理学中,糖原染色是常规的染色方法之一。在1946年,McManus最先利用高碘酸-雪夫技术来显示黏蛋白,该染色液不仅能显示中性黏液性物质和某些酸性物质,还能够显示糖原,以及霉菌、软骨、垂体、色素、真菌、淀粉样物质、基底膜等,因此该法常用来显示糖原和其他多糖,
过碘酸又被称高碘酸,是一种强氧化剂,它能氧化糖类及有关物质中的1,2-乙二醇基,使之变为二醛,并且醛可以结合Schiff试剂形成一种品红化合物,产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质,在实验过程中应注意选择适宜的高碘酸浓度并控制好氧化时间,使氧化控制在即能把乙二醇基氧化成醛基,又不至于过氧化的时间范围内,对于整个方法而言这是很关键的步骤。
本糖原PAS染色液的特点是采用Solarbio特有配方技术,不但大大增强了染色效果;性能稳定,特异性强;最为关键的是操作简捷,仅需1h左右。
有效期:6 个月有效。
自备材料:
1、10%的福尔马林固定液
2、蒸馏水
3、乙醇
操作步骤(仅供参考)):
1、实验过程中,常规固定,常采用 10%的福尔马林,常规脱水包埋。
2、冰冻切片直接入蒸馏水;石蜡切片脱蜡入蒸馏水。
3、自来水冲洗2~3min,再用蒸馏水充分浸洗2次。
4、放入过碘酸溶液中,室温放置5~8min,一般时间控制在10min以内。
5、自来水冲洗1次后蒸馏水浸洗2次。
6、将上述样本放入SchiffReagent,置于室温阴暗处,浸染10~20min。
7、蒸馏水轻柔冲洗10min。
8、样本放入苏木素染色液中,染细胞核1~2min。
9、在酸性乙醇分化液中分化2~5s。
10、蒸馏水冲洗10~15min后,更换双蒸水清洗,使其返蓝。
11、逐级常规乙醇脱水。二甲苯透明,中性树胶封固。
染色结果:
PAS 反应阳性物质 | 细胞核 | 细胞质 |
红色或紫红色 | 蓝色 | 深浅不一的红色 |
备注:颜色深浅很大程度上取决于样品在过碘酸溶液和 SchiffReagent 中作用时间的长短。
阴性对照(可选):
1、对照切片可以使用用唾液,处理取唾液片(过滤后用)30~60min后,与其他切片共同放入过碘酸溶液。结果应呈现为阴性。
2、可以取淀粉酶为对照,取淀粉酶1g于双蒸水或PBS(pH5.3)100ml,处理30~60min后,与其他切片共同入过碘酸溶液。结果应为阴性。
3、如果对照片采用其自身样本,对照片可以不经过碘酸溶液这一步,直接入SchiffReagent。染色结果:对照片呈阴性反应,无紫红色颗粒。
注意事项:
1、切片脱蜡应尽量处理干净,否则影响染色效果。
2、氧化时的温度以 18~22℃最佳且过碘酸氧化时间不宜过久。
3、过碘酸溶液和SchiffReagent应4℃密闭保存,实验进行过程中避免接触过多的阳光和空气。实验准备时可以提前30min将其取出在室温恢复后,避光暗处使用。
4、酸性乙醇分化液需要经常更换新液,其分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和酸性乙醇分化液的新旧而定,另外分化后自来水冲洗时间应该足够。
5、作用时间在过碘酸溶液和SchiffReagent中非常重要,该情况可根据切片厚薄、组织的类别等具体实验情况决定。
6、本染色液常用于常规组织切片染色,对于真菌、细胞、极其薄的切片,因为其过碘酸溶液和苏木素溶液浓度更低,不宜过染,建议采购糖原PAS染色试剂盒(细胞真菌专用)。
7、冷冻切片染色尽量在短时间内完成。
8、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
9、本产品仅供科研使用,严禁它用。